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上海伯杰副溶血弧菌MLST试剂盒简易快速实现分型
发布时间:2017-05-24   浏览:312  

“出波莼菜滑,上市鮆鱼鲜”,初夏正是海产品当道的季节,鱼、虾、贝类等海产品逐渐霸占了不少人的“舌尖”,那种黏糯绵软的口感让不少吃货流连忘返于大小排挡之间。然而美味的食材未必无害,天然存在于海水、鱼贝类等海产品中有一种生命力顽强的嗜盐菌叫副溶血性弧菌,能在抹布和砧板上能存活1个月以上,不过不耐高温。所以在烹饪海产品的时候,一定要煮熟煮透,千万别贪念那在齿间流淌弥散开来的鲜嫩多汁。




认识副溶血性弧菌


副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种革兰氏阴性菌,是沿海地区常见的一种食源性致病菌,通常会引发患者急性肠胃炎,进而导致腹泻、头痛、呕吐、恶心、低烧和肠胃痉挛等反应。对于免疫力低下的人群可能因抢救不及时而导致死亡。近些年来,由Vp引起的食物中毒事件在世界各地频繁发生,特别是沿海国家和地区。依据食源性疾病监测网数据显示,其感染规模已经远远超过了沙门氏菌,志贺氏菌和霍乱弧菌,跃居首位成为主要的食源性致病菌。因此,Vp所引发的食物中毒已经成为世界范围内严重的食源性公共卫生问题。那么对于这种食源性病原菌的检测和分型溯源技术则是预防控制食源性疾病的关键环节。



副溶血性弧菌分型技术


目前用于副溶血性弧菌常用分型技术主要有两大类:表型分型法和分子分型法。但由于病原菌能观察到的表性特征有限,因此不能提供菌株间足够的信息,在实际应用中存在一定的局限性。相比较而言,能快速、准确鉴别病原菌分子分型方法则发挥至关重要的作用。常见的几种分子分型方法及其优缺点见下表。


副溶血性弧菌几种分子分型方法及其优缺点


        但由Vp引发的感染和爆发的菌株都属于大流行株的同源复合体,在以往的分型溯源技术中,包括随机引物PCR、脉冲场凝胶电泳、核糖分型以及直接基因组限制酶分析所鉴定出来的衍生体与原始的血清型高度相似或难以区分,在菌株遗传的亲缘关系上只能提供有限的遗传信息。



副溶血性弧菌多位点序列分型(MLST)法


多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)是一种基于核酸序列测定的细菌分型方法。这种方法通过PCR扩增多个管家基因内部片段并测定其序列,分析菌株的变异。MLST操作简单,结果能快速得到并且便于不同实验室的比较,已经用于多种细菌的流行病学监测和进化研究。随着测序速度的加快和成本的降低,以及分析软件的发展,MLST逐渐成为细菌的常规分型方法。


        以选定的管家基因的序列为基础,依据等位基因的多样性确定菌株的序列型的多位点序列分型(MLST)法,则显露其在Vp菌株的辨识优势。这得益于Gonzalez-Escalona等人筛选出7个管家基因片段:recA(RecA蛋白)、dnaE(DNA聚合酶III,α亚基)、gyrB基因(DNA解旋酶,B亚基)、dtdS(2-氨基-3羟基丁酸脱氢酶)、pntA(转轻酶α亚基)、pyrC(二氢乳清酸)和tnaA(色氨酸酶),其中有前三个基因位于染色体I上,后四个基因位于染色体II上。所选的这7个管家基因所包含的信息可以很全面地展现了Vp遗传特征的图谱。另外他们还创建了共享数据库PubMLST数据库(http://pubmlst.org/vparahaemolytieus),方便研究者们比较世界不同国家、地区实验室所产生的数据,有助于副溶血弧菌进化图谱的形成。



上海伯杰副溶血弧菌多位点序列分型试剂盒(PCR法)介绍


病原体的基因测序技术服务一直是上海伯杰医疗科技有限公司的亮点产品,公司也不断将前期成熟的技术服务转化成客户能简易操作使用的试剂盒,满足不同客户的需求。


副溶血弧菌多位点序列分型试剂盒(PCR法)采用预制引物的96孔板,只需三步加样就能完成繁琐的副溶血弧菌7个管家基因的扩增,通过对扩增产物进行测序、拼接,获得的基因序列与相关的数据库比对,获得各个管家基因位点的等位基因数值,并形成相应的等位基因谱,判断其序列型。



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