4008603688

​甲型流感病毒100多种亚型HxNy快速分型方案

发布日期:2018-08-22 浏览次数:17

流感病毒易于变异,导致流感不同规模的流行,更为重要的是新型动物流感病毒可跨种属传播,导致人的感染和死亡,甚至世界范围的流感大流行,给人类健康、社会稳定带来巨大威胁。及时发现和确定流感病毒新型别,积极采取有效防控和治疗措施,是防止疫情进一步发展扩散的关键之一。




  

●甲型流感病毒特征

甲型流感病毒属于正粘病毒科,大多呈球形,直径80-120nm,有囊膜。病毒基因组为单股负链RNA,其基因组由8个单股负链RNA片段组成。其粒子表面有血凝素(Hemag-glutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)两种表面结构蛋白。根据HA和NA的抗原性差异,主要可分为16种HA亚型(H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)。不同亚型甲型流感病毒的致病性和宿主嗜性等均有较大差异。低保真RNA聚合酶会引起病毒的高突变率和重组,造成病毒分子出现多样性,使每个病毒亚型可变异为多种不同的分支。



图1 流感病毒的结构示意图


●甲型流感病毒的自然分布及传播途经

甲型流感病毒在动物中广泛存在,目前已知主要亚型包括16种血凝素亚型和9种神经氨酸酶亚型的甲型流感病毒都可以在鸟类特别是在水禽中存在,甲型流感病毒还可以感染其它动物,如猪、马、海豹以及鲸鱼和水貂等。

H1-H3亚型和N1、N2亚型与人流感有关。H5和H7亚型通常只感染禽类,其中的一些毒株(以H5N1、H7N7为代表)所引起的禽类疾病称高致病性禽流感。已明确禽类能将上述毒株传染给人(主要为H5N1、H5N6、H6N1、H7N7、H7N2、H7N3、H7N9、H9N2、H10N8等),具有启动人类新的流感大流行的潜在威胁。2009年发现一个新的甲型H1N1亚型流感病毒株感染人类,来源于猪、禽类和人类的病毒基因片段。




图2 流感病毒主要型别的自然分布及传播途经


●甲型流感病毒变异

流感病毒很容易变异,基因组自发的点突变聚集到一定程度时,即引起HA和NA抗原漂移。这种在较小程度上发生的基因变异,每年或每几年频繁发生。若两种不同亚型毒株感染细胞,使其基因组发生重组,则可引起抗原位移,导致新血清型的出现。HA及NA的各自变异不断组合成新的变异株,足够大的变异使人群中对原有流行株所建立的免疫屏障不再能发挥有效的保护作用。当人群充分易感时,变异株的攻击就引起疫情暴发,这是导致流感大流行反复发生的重要原因。显著的变异主要发生于甲型流感病毒,乙型流感病毒则少见得多,而丙型流感病毒一般不发生。


●伯杰“甲型流感病毒HxNy分型试剂盒”


国家流感中心下发的“全国流感监测技术指南(2017年版)”规定各流感网络实验室对于HA阳性、但不能区分其型别或亚型的毒株和阳性标本务必在48 小时内送至国家流感中心。发现新亚型(或疑似新亚型),应当立即上报,同时将相关毒株和阳性标本送国家流感中心复核检测。

由于甲型流感病毒亚型多、突变率高、易发生重配,所以准确分型尤为重要。以往对甲型流感病毒核酸real-time PCR检测阳性,常见HA或者NA亚型未能分型的标本,通常通过普通RT-PCR方法扩增甲型流感的HA和NA基因,测序后序列通过Blast比对确定其亚型,操作繁琐且时间较长。

上海伯杰医疗科技有限公司研发团队通过公司内部强大的流感病毒基因数据库,根据软件的数据模型推测亚型演变进化,科学推测预期的序列,合理精准设计各亚型引物探针。针对常见甲型流感病毒各亚型的HA或者NA设计通用引物探针,多数产品包含HA或NA各亚型的多套引物探针,基本能涵盖目前国内外流行的各亚型甲型流感病毒。甲型流感病毒HxNy快速分型试剂盒已对伯杰核酸样本库中的pdm09H1N1、H1N1、H1N2、H2N3、H3N2、H3N3、H4N6、H5N2、H5N1、H5N6、H5N8、H6N6、H7N4、H7N6、H7N9、HPAI-H7N9、H7N8、H9N2、H11N3、H11N7、H12N8等21个型别的标本核酸进行验证,符合率达100%。

伯杰“甲型流感病毒HxNy快速分型试剂盒(荧光PCR法)”采用已加qPCR反应液mix和引物探针的预制液PCR管,96孔PCR板上包含4套H1-H16和N1-N9的25种靶标基因,试剂内标靶基因为人的核糖核酸酶P(RnaseP)。试剂盒规格为4人份/盒,特殊定制的PCR板可根据当天样品检测数进行裁剪。检测时将待检样品核酸直接加入对应PCR管中,瞬间离心后即可上机,1分钟加样,70分钟快速对甲型流感病毒阳性的标本进行HxNy分型,操作方便快捷。




图3 甲型流感病毒HxNy快速分型试剂盒(荧光PCR法)


伯杰承诺:

用该试剂盒检出的甲型流感病毒新亚型,我们免费提供测序服务,第一时间为客户进行序列确认。


伯杰拥有一支从事病原体测序工作多年的专业技术团队,根据客户需求提供个性化服务。对于基因变异较大的病原体及临床样本这种病毒含量较低的标本,会进行边测序边设计引物,不断优化体系调整实验方案,全力以赴为客户获取所需的基因序列。获得序列需要专业分析,我公司贴心为客户提供增值服务,伯杰生物信息专家将为您量身定制,一对一服务,可进行序列比对BLAST、多重序列比对MSA,开展Beast分化时间进化分析,遗传进化分析Phylogenetics、突变分析Mutation analysis,构建分子进化与系统发生树,Simplot重组分析并进行评估。


●伯杰荧光PCR试剂盒(甲型流感病毒所有亚型系列)

该系列产品除了上面的预分装包装外,还有16种HA亚型和9种NA亚型的独立包装规格,具体产品目录如下:



图4 伯杰荧光PCR试剂盒(甲型流感病毒所有亚型系列)


●伯杰荧光PCR试剂盒各种监测多重组合推荐方案



图5 各种监测多重组合推荐方案